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文章出處:格艾特 閱讀量:3 發(fā)表時(shí)間:2023-08-02 11:01:53
現在許多科研單位和花木生產(chǎn)企業(yè)都已配置了組織培養室。組培技術(shù)已成為重要的生物技術(shù)之一。然而有的組培室組培苗的數量和質(zhì)量卻一直沒(méi)有質(zhì)的飛躍,究其原因,最主要的因素就是污染所造成的。被污染后首先是生產(chǎn)成本的提高;其二,對植株造成傷害;其三,增加接種源受污染的機率。
組培室常見(jiàn)污染源
組織培養過(guò)程中的污染源主要有以下幾種:
(1)戶(hù)外風(fēng)大,菌類(lèi)進(jìn)屋機會(huì )多。有風(fēng)就有沙,有沙就有塵,有塵就有菌,菌塵共存,這是菌類(lèi)進(jìn)屋的主要原因之一。
(2)屋內太潮,菌類(lèi)繁衍多。需保持室內空氣干燥,如使用空調“除濕”功能,也可減少真菌生長(cháng)繁殖。
(3)人員帶菌多。在整個(gè)操作室內,人員可說(shuō)是很大的帶菌者,不管在毛發(fā)或是衣服等地方,都隱藏著(zhù)數不清的菌類(lèi)。在進(jìn)入操作室前,能對作業(yè)人員進(jìn)行清潔處理,比如換上干凈的白大褂,換上實(shí)驗室的鞋,衣服鞋每星期洗一次,上超凈臺前手要用肥皂清洗兩遍,接種前手再用酒精擦拭一遍。
(4)屋內不干凈。紫外線(xiàn)能殺滅或抑制真菌生長(cháng),因此應在每次接種前進(jìn)行20分鐘的紫外燈消毒。
(5)清理屋內帶菌組培苗。在植物病害中,真菌所引起的病害尤其嚴重,且因會(huì )產(chǎn)生孢子,隨著(zhù)空氣飄散。一旦落入適當的環(huán)境下,一粒小小的孢子便會(huì )擴大成一個(gè)菌落,污染整個(gè)組織培養瓶。因此一旦有真菌污染的組培苗,就要用高壓滅菌器完全消滅,以防擴散。(6)接種不正確。不正確操作也會(huì )增加污染機率,如開(kāi)蓋太快,滅菌不夠,操作過(guò)慢等。接種過(guò)程應該輕開(kāi)蓋,快操作。
組培室污染原因
若污染菌類(lèi)是零星分散在培養基中,則可確定是人為引起的污染,比如培養基滅菌不完全;超凈工作臺長(cháng)時(shí)間不換濾網(wǎng),致使凈化能力降低;接種用具滅菌不完全;操作不正確,動(dòng)作生硬緩慢,開(kāi)瓶時(shí)間太久,接種臺擺放物品雜亂,操作在人體范圍之內;接種室長(cháng)期不滅菌,菌類(lèi)太多等。
若污染菌類(lèi)是從材料周?chē)L(cháng)起,則可證明是植物材料帶菌引起??赡苁墙臃N用具滅菌不完全,接種時(shí)材料被污染;或者是未及時(shí)發(fā)現污染苗,接種過(guò)程交叉感染等。
若菌類(lèi)從材料培養基以上部分長(cháng)起,而不是從培養基先長(cháng)起,且發(fā)生在5天以后,則說(shuō)明是材料帶的內生菌。若從培養基以下開(kāi)始長(cháng)菌,發(fā)生時(shí)間較早,且有從里向外的趨勢,則說(shuō)明是切口引起的污染,原因可能是滅完菌后,未剪去兩個(gè)切口或雖剪但器具帶菌。
組培室污染苗如何搶救?
真菌污染后,如果已形成孢子,則要經(jīng)高壓滅菌后扔掉,即使僅形成菌絲也應處理后扔掉,因為菌絲能夠達到材料內部,因此,真菌污染是滅絕性的。
細菌污染后,由于細菌繁殖是靠芽孢,細菌不會(huì )彌散在整個(gè)空間,因此只要及時(shí)發(fā)現,可將材料上部未感菌的部分剪下轉接,材料仍可以用。